Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程里逐渐扩展

从第一次显现用到肝细胞自身血液到显现用到1DF肾病诊断病症的成果所部在婴幼儿时期就有很好的所述，多个肝细胞自身血液中都性的婴幼儿中都曾70%在血液变换后10周内中风肾病，而随访15年的婴幼儿这一%上升到84%。即便如此之下，占去诊断1DF肾病一半以上的DF1DF肾病的得病机制还未得到充分的统计分析。

越来越多的人开始应用于分阶段系统来定义1DF肾病的成果：幼本体在显现用到多种肝细胞自身血液时离开第1阶段，显现用到血糖异常时离开第2阶段，显现用到病症时离开第3阶段。一些多发肝细胞自身血液中都性的幼本体，在1期和2期，成果更快，并发展为得病的1DF肾病。我们先前所述了一组在首次扫描到多种肝细胞自身血液样本后至寡10年无肾病的变比较慢成果者，这组病人人数寡，但特征更为指明。随后，我们推测肝细胞自身上皮细胞特异性CD8+T细胞膜化学反应在成果加速的病人中都必需不依赖于，但在全面性得病和依然依赖于的肾病病人中都很容易扫描到。这似乎表明，与成果病人即便如此，这些病人自身病原本体的适度增强。

中期统计分析表明，尽管适度性T细胞膜(Treg)数量正常，但肾病病人依赖于一些功用缺陷，其中都有数对IL-2的化学反应技能降低。此外，肾病病人中都的震荡CD4+T细胞膜似乎对适度兼具抵抗性，表现为震荡T细胞膜的选择性减弱，自然转化成的Treg和人本体内转化成的作用于Treg，以及上皮细胞经历的CD4+T细胞膜中都IL-2化学反应减弱。本统计分析的最终目标是所述了CD4+适度性T细胞膜(Treg)在在在极加速成果者中都的特征，他们的平均年纪为43岁(31-72岁)，随访整整为18-32年。

方法：BOX统计分析是一项以人群为基础的两端统计分析，在21岁所列复发的病人亲属中都检查和1DF肾病的危险因素。我们先前所述了依然加速成果者的特征，他们保持稳定多重肝细胞自身血液中都性超过10年，但未显现用到肾病的诊断病症，比较慢性或非展开性自身免疫。随后，10名继续保持稳定无肾病并愿意提供大量血液样本的加速成果者纳入T和B细胞膜功用统计分析。在目前的统计分析中都，8名比较慢成果者(SP组)，中都位年纪43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的肝细胞自身血液中都性。所有的与会者都保持稳定1DF肾病成果的1期，尽管一些人随后失去了肝细胞自身血液对某些上皮细胞的中都性化学反应，然而，一名病人已经保持稳定2期至寡6年，但未显现用到诊断病症，一名病人被诊断为肾病，该受试者72岁，在采集实验者样本时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据统计分析中都对该遗传物质展开了单独分析。转化外周血单个核细胞膜(PBMCs)，采用多参数流式细胞膜法术和T细胞膜选择性试验性分析遗传物质中都Treg的频所部、表DF和功用。应用于FlowSOM和CITRUS(聚类检测、相关联和回归)展开无监督聚类统计分析，分析Treg表DF。

结果：与身心健康遗传物质即便如此，来自比较慢成果本体的失忆CD4+T细胞膜的监督聚类推断，作用于的失忆CD4+ Treg频所部上升，与利尿剂作用于的TNFR相关蛋白(GITR)解读上升有关。一名HbA1c升高的病人与成果加速者和变换的折衷组即便如此，Treg五音有所不同。功用统计分析表明，与身心健康遗传物质即便如此，来自加速成果本体的Treg介导的CD4+震荡T细胞膜选择性突显现出受损。表现为对震荡CD4+T细胞膜CD25和CD134解读的选择性上升。

左图1 有系统的表DF统计分析推断，CD4+Treg亚DF在比较慢成果队列中都上升。由FlowSOM变换成的Treg三楼，围住在来自所有遗传物质的活CD4+CD45RA -细胞膜上。根据标明物解读检测显现出10个元簇:失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;失忆T cell_4;CD49b失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)应用于9个不同Treg标明变换成的10个元簇的MST。每个数据流值得一提的是一个空降兵(100个空降兵)，相当大的元空降兵(10个元空降兵)在数据流组远处上色。每个数据流中都的饼左图回应单个标明的解读高至。(b)每个元聚类的热左图，以推断整本体标明解读。(c, d)为HD组(c)和SP组(d)变换成左图，以及FlowSOM比对的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下金属量为每个metacluster罐线或左图(金属量> 0.05%)确切为HD和SP组:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜(h)、失忆T cell_1(i),失忆T cell_2 (j),失忆T cell_3 (k) n d CD49b失忆T细胞膜(l)。浅蓝色红色值得一提的是**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测。此键适用于左图形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

左图2 应用于CITRUS的预测模DF表明，Treg频所部的上升是成果加速的标志。评定门控(a - f)和柑橘统计分析(g-k)比较SP与会者和变换的HD与会者在CD4+CD45RA−T细胞膜上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群本体的别具特色左图。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR解读展开转化，模拟器FlowSOM群本体。(b) HD(外缘)和SP(白点)组以及遗传物质SP 606(浅蓝色)中都CD25+ cd127的频所部汇总左图。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+门控开集的罐线或左图;(c) HLA-DRloGITR−(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)玉米簇锥形由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3解读强度上色，箭头突显现出的簇被比对为SP和HD队列之间的不同。(j)罐线或左图推断了在SP(白点)和HD(灰点)组中都，CITRUS失忆Treg_3和Treg_4的相比之下金属量(%)。(k)直方左图推断每个簇的表DF(粉红色)和Treg标明相比之下解读与文化背景解读(浅蓝色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。文化背景与所有其他簇中都标明的解读有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对符号秩检测

左图3 与身心健康献血者即便如此，成果加速者失忆treg的GITR上升。每个失忆CD4+T细胞膜元簇(失忆T细胞膜_1;失忆T cell_2;失忆T cell_3;CD49b +失忆T细胞膜;HLA-DR + GITR +失忆T细胞膜;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)扫描每个解读标明的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的解读热左图(sp606不有数在内)。(c,d)失忆Treg_4元簇中都所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)的FlowSOM GITR解读结合，推断直方左图(c)和汇总左图(d)。Wilcoxon配对符号秩和检测，p< 0.07(浅蓝色)所有遗传物质有数，p< 0.05(浅蓝色)遗传物质SP 606和变换的HD不有数在测试中都。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中都GITR解读，从评定门控，从所有HD(灰色)、所有SP(浅蓝色)和SP 606(浅蓝色)结合，推断直方左图(e)和汇总左图(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对符号秩检测

左图4 来自加速成果的CD4+ treg细胞膜操控震荡CD4+T细胞膜的技能降低。SP组用浅蓝色的线或和红色回应，HD组用白色的线或和红色回应，浅蓝色的线或/红色回应遗传物质sp606。应用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜展开分选。CD4+CD25−(转发者)被标明为CFSE, Treg按观察的%化学反应物。用抗CD3 /28微珠还原细胞膜，养成3天后展开流式细胞膜法术扫描。(a-d)与CD4+转发者相比之下应的treg养成(作用于)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD转发者养成。(a,b,f) CFSE增殖(a,e)和CFSE选择性比所部(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的选择性比所部。应用于中都性折衷(作用于的拥护细胞膜不含treg)计算选择性比所部。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

左图5 震荡CD4+T细胞膜对加速成果的T细胞膜还原的选择性更尖锐。SP组用浅蓝色的线或和红色回应，HD组用白色的线或和红色回应，浅蓝色的线或/红色回应遗传物质sp606。应用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞膜展开分选。CD4+CD25−(转发者)被cfsel标明，treg按观察的%化学反应物。用抗CD3 /28微珠还原细胞膜，养成3天后展开流式细胞膜法术(CD25反染)和细胞膜因次子统计分析。HD Treg与HD、SP或sp606转发者共同养成。(a,b) CFSE增殖(a)和CFSE选择性百分所部(b)。(c,d) CD25选择性百分所部(c)和CD134选择性百分所部(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共养成中都的解读。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差统计分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得显现出的结论是，来自加速成果次子的还原失忆CD4+Treg在GITR解读中都得到了扩展和丰富，强调了促使统计分析Treg在1DF肾病风险幼本体中都的异质性的实质。

译者显现出处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28